La Enfermedad Celiaca (EC) es una enteropatía crónica de carácter autoinmune causada por el gluten y prolaminas relacionadas que se pone de manifiesto en individuos genéticamente susceptibles. La exposición al gluten dispara una respuesta inflamatoria en la mucosa del intestino delgado que provoca una interferencia en la absorción de los nutrientes, lo que conduce a una deficiencia nutricional.
Aunque se trata de una enfermedad poligénica, se destaca la fuerte asociación con genes localizados en la región HLA (Human Leukocyte Antigen) de clase II. Los genes HLA-DQA1 y HLA-DQB1 codifican las subunidades α y β, respectivamente, de la proteína heterodimérica HLA-DQ.
La gran mayoría de los pacientes celíacos (90-96%) presentan el heterodímero HLA-DQ2, más precisamente la variante o isoforma HLA-DQ2.5, mientras que los restantes presentan mayoritariamente el heterodímero HLA-DQ8. Últimamente se ha observado que existen algunos pacientes que presentan solo uno de los alelos que codifican el heterodímero HLA-DQ2.5 (1).
En la siguiente tabla se indican los alelos de los genes HLA-DQA1 y HLA-DQB1, así como los haplotipos que conforman, responsables de la formación de los distintos heterodímeros o isoformas DQ asociadas a EC:
*Incluye los alelos HLA-DQA1*05:01 y HLA-DQA1*05:05.
¥Incluye los alelos HLA-DQB1*02:01 y HLA-DQB1*02:02.
£Incluye los alelos HLA-DQA1*03:01 y HLA-DQA1*03:02.
En azul y en negrita se resaltan los alelos de riesgo a enfermedad celíaca. Los alelos no resaltados se muestran en la tabla porque conforman un haplotipo con el alelo de riesgo al que acompañan.
Debe destacarse que estos heterodímeros se encuentran presentes en una gran proporción (35-40%) de la población general que no presenta EC, por lo cual la mera presencia de estos es una condición necesaria pero no suficiente para desarrollar EC o indicar susceptibilidad genética a EC.
El diagnóstico de la EC es complejo por la diversidad de las manifestaciones clínicas y por la similitud con otras enfermedades del tracto digestivo. Aunque las pruebas serológicas y la biopsia intestinal son suficientes para proponer un diagnóstico provisional, la tipificación HLA DQ constituye una prueba confirmatoria útil gracias a su alto valor predictivo negativo permitiendo excluir la EC desde el diagnóstico a aquellos que no presenten el haplotipo DQ8 ni ambos alelos de riesgo de DQ2.5.
A diferencia del diagnóstico de EC mediante biopsia o serológico, la genotipificación consiste en único test cuya exactitud no es dependiente del consumo de gluten de manera que esta determinación es una herramienta muy valiosa en la siguientes situaciones (2):
• Cuando los pacientes se adhieren a una dieta libre en gluten antes de las pruebas de diagnóstico y se niegan a someterse a una provocación con gluten.
• Cuando los resultados serológicos y biopsia son indeterminados.
• Cuando no se observa mejora luego de comenzar una dieta libre de gluten, la tipificación de HLA permite excluir a los pacientes diagnosticados incorrectamente, lo que puede explicar la falla en la respuesta a la dieta.
• Como test predictivo (exclusión) en poblaciones de riesgo, como por ejemplo los familiares de primer grado de un paciente celíaco, los pacientes con síndrome de Down, los diabéticos tipo I.
El área de Biología Molecular de Cibic Laboratorios ha incorporado recientemente un analizador de flujo Bio-Plex 200® – BIORAD (Imagen 1) que utiliza tecnología Luminex y permitió la implementación de la metodología PCR-SSO para la genotipificación de los genes HLA Clase II. Esta metodología permite reducir los tiempos de proceso y de análisis, reflejándose en una mejora en los tiempos de entrega de resultados.
Imagen 1. Instrumento Bio-Plex® 200-BIORAD
El método de tipificación mediante PCR-SSO (Imagen 2) se basa en una primera instancia en la amplificación, mediante PCR, de 4 exones específicos para el loci en estudio con primers biotinilados. Luego, para discriminar entre los diferentes alelos, se utilizan sondas de oligonucleótidos específicas de secuencia (SSO) unidas a microesferas conformadas por fluorocromos, que se unen al ADN previamente amplificado para identificar los alelos correspondientes, los cuales son revelados mediante ficoeritrina unida a estreptavidina (SAPE). Un analizador de flujo, Bio-Plex 200® – BIORAD, identifica la intensidad fluorescente SAPE en cada microesfera. Luego se utiliza un software para asignar reacciones positivas o negativas en función de la intensidad de la señal fluorescente. La asignación de la tipificación de HLA se basa en reacciones de sondas positivas y negativas en comparación con las secuencias del gen HLA publicadas.
Imagen 2. Procedimiento PCR-SSO.
Referencias:
1- Núñez C, Garrote JA; en nombre del Grupo de Trabajo de “Inmunología y Genética” de la Sociedad Española de Enfermedad Celíaca (SEEC). Recomendaciones para la elaboración e interpretación de informes genéticos en enfermedad celíaca. Rev Esp Enferm Dig 2018;110(7):458-461.
2- J. A. Tye-Din y cols. Appropiate clinical use of human leukocyte antigen typing for coeliac disease: an Australasian perspective. Internal Medicine Journal 45 (2015)
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Sección: Biología Molecular
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